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分子雜交儀原理
分子雜交儀又稱分子雜交爐和分子雜交盒,是一種通過核酸分子雜交檢測基因組中是否存在已知基因序列的裝置。它廣泛應(yīng)用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的檢測和遺傳疾病的基因診斷。
根據(jù)不同實驗的需要,分子雜交儀可選用不同規(guī)格型號。攪拌技術(shù)是現(xiàn)代實驗室的理想設(shè)備,它可以代替塑料攪拌袋和水浴搖瓶,避免攪拌袋損壞帶來的污染風(fēng)險?;旌蠣t具有微機精確控溫、爐內(nèi)空氣循環(huán)裝置設(shè)計獨特、升溫速度快等特點。
它廣泛應(yīng)用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的定性和定量檢測以及疾病的診斷。因此,它不僅在分子生物學(xué)領(lǐng)域,而且在臨床診斷中有著廣泛的應(yīng)用。
分子雜交儀由盒體、混合瓶或離心管、混合管、振動篩、隔膜、計算機控制系統(tǒng)等組成,如圖所示,不同類型盒體所含的試管、微孔板、滑板、平板的數(shù)量也不同。
分子雜交儀的原理如下
根據(jù)堿基互補配對原理,在一定條件下,利用標記的已知DNA或RNA片段(探針)對樣品中待測DNA序列進行檢測。
在生理條件下,DNA是一種穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu)。在體外,當有變性因素(如溫度超過65℃)℃, 胺或極端pH),DNA分子中的氫鍵斷裂并解離成兩個單鏈DNA。這種現(xiàn)象稱為變性。去除變性因子后,單鏈DNA可以重組形成穩(wěn)定的雙鏈螺旋結(jié)構(gòu)。這個過程稱為復(fù)性或退火。
在復(fù)性過程中,如果存在與部分樣本核酸序列相同或高度同源的外源性單鏈DNA片段或寡核苷酸(一般為17-45堿基),則二者可以通過互補堿基形成雜交,即雙鏈DNA分子。這個過程叫做雜交。當一個已知的DNA片段加入到重新折疊的DNA中,如果它能結(jié)合成一個雙鏈分子,就意味著樣品中含有一個已知的DNA序列。